準確的分析方法對于生物化學實驗是極為重要的,在各種生物化學分析技術中,首先要熟練掌握的就是準確的移液技術。為此要用到各種形式的移液管,其中有一些是學生們在化學實驗中未用過而在生化實驗中是常用的。
1 滴管
使用方便,可用于半定量移液,其移液量為1mL~5mL,常用2mL,可換不同大小的滴頭。滴管有長、短兩種,新出的一種帶刻度和緩沖泡的滴管,可以比普通滴管更準確地移液,并防止液體吸入滴頭。
2 移液管(吸管)
吸管使用前應洗至內壁不掛水珠,1mL 以上的吸管用吸管刷刷洗,0.1mL、0.2mL 和0.5mL的吸管可用洗滌劑浸泡,必要時可以用超聲清洗器清洗。由于鉻酸洗液致癌,應盡量避免使用。若有大量成批的吸管洗后沖洗,可使用沖洗桶,將吸管向上置于桶內,用自來水多次沖洗后再用蒸餾水或無離子水沖洗。
吸管分為兩種,一種是無分度的,稱為大肚吸管,度較高,其相對誤差A 級為0.7%~0.8%,B 級為1.5%~0.16%,液體自標線流至口端(留有殘液),A 級等待15s,B 級等待3s。另一種吸管為分度吸管,管身為一粗細均勻的玻璃管,上面均勻刻有表示容積的分度線,其準確度低于胖肚吸管,相對誤差A 級為0.8%~0.2%,B 級為1.6%~0.4%,A 級、B 級在吸管身上有A、B 字樣,有”快”字則為快流式,有”吹”字則為吹出式,無”吹”字的吸管不可將管尖的殘留液吹出。吸、放溶液前要用吸水紙擦拭管尖。
3 微量進樣器
微量進樣器常用作氣相和液相色譜儀的進樣器,在生化實驗中主要是用作電泳實驗的加樣器。
常可分為無存液和有存液兩種。
(1)10μL 以下的極微量液體進樣。
無存液微量進樣器:進樣器的不銹鋼芯子直接通到針處,不會出現存液。
(2)10μL~100μL 有存液微量進樣器:不銹鋼的針尖管部分是空管,進樣器的柱塞不能到達,因而管內會存有空氣或液體。
使用注意事項是:
①不可吸取濃堿溶液,以免腐蝕玻璃和不銹鋼零件;
②因為有存液,所以吸液時要來回多拉幾次,將針尖管內的氣泡全部排盡;
③針尖管內孔極小,使用后尤其是吸取過蛋白質溶液后,必須立即清洗針尖管,防止堵塞。若遇針尖管堵塞,不可用火燒,只能用φ0.1mm 的不銹鋼絲耐心串通;
④進樣器未潤濕時不可來回干拉芯子,以免磨損而漏氣;
⑤若進樣器內發(fā)黑,有不銹鋼氧化物,可用芯子蘸少量肥皂水,來回拉幾次即可除之。
4 自動取液器
這種取液器在生化實驗中大量地使用,它們主要用于多次重復的快速定量移液,可以只用一只手操作,十分方便。移液的準確度(即容量誤差)為±(0.5%~1.5%),移液的精密度(即重復性誤差)更小些,為≤0.5%。
取液器可分為二種:一種是固定容量的,常用的有100μ L 等多種規(guī)格。每種取液器都有其的聚丙烯塑料吸頭,吸頭通常是一次性使用,當然也可以超聲清洗后重復使用,而且此種吸頭還可以進行120℃高壓滅菌;另一種是可調容量的取液器,常用的有200μL、 500μL 和1000μL 等幾種。
可調式自動取液器的操作方法是用拇指和食指旋轉取液器上部的旋鈕,使數字窗口出現所需容量體積的數字,在取液器下端插上一個塑料吸頭,并旋緊以保證氣密,然后四指并攏握住取液器上部,用拇指按住柱塞桿頂端的按鈕,向下按到*停點,將取液器的吸頭插入待取的溶液中,緩慢松開按鈕,吸上液體,并停留1~2秒鐘(粘性大的溶液可加長停留時間),將吸頭沿器壁滑出容器,用吸水紙擦去吸頭表面可能附著的液體,排液時吸頭接觸傾斜的器壁,先將按鈕按到*停點,停留一秒鐘(粘性大的液體要加長停留時間),再按壓到第二停點,吹出吸頭尖部的剩余溶液,如果不便于用手取下吸頭,可按下除吸頭推桿,將吸頭推入廢物缸。
自動取液器的使用注意事項是:
①吸取液體時一定要緩慢平穩(wěn)地松開拇指,絕不允許突然松開,以防將溶液吸入過快而沖入取液器內腐蝕柱塞而造成漏氣。
②為獲得較高的精度,吸頭需預先吸取一次樣品溶液,然后再正式移液,因為吸取血清蛋白質溶液或有機溶劑時,吸頭內壁會殘留一層”液膜”,造成排液量偏小而產生誤差。
③濃度和粘度大的液體,會產生誤差,為消除其誤差的補償量,可由試驗確定,補償量可用調節(jié)旋鈕改變讀數窗的讀數來進行設定。
④可用分析天平稱量所取純水的重量并進行計算的方法,來校正取液器,1mL 蒸餾水20℃時重0.9982g。